HPLC示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖：上

摘要：利用高效液相示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖，方法采用Alltech C18柱(250× 4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液(3∶97)，流速1 mL /min,柱温40℃ ，进样量20μL.N-乙酰-D-氨基葡萄糖在4.18～ 1 079.33μg mL范围内呈显著的线性关系，相关系数为0.9993，方法的加标回收率98.78%，检出限4.18μg mL。

关键词:HPLC，D-氨基葡萄糖盐酸盐， N-乙酰-D-氨基葡萄糖。

D-氨基葡萄糖盐酸盐(C6H11O5NH2·HCl)(D-Glucosamine Hydrochloride)，是一种海洋生物制剂,在人体内具有重要的生理意义：参与肝肾解毒，具有抗炎保肝等作用，在医药上用于风湿性关节炎症和胃溃疡疾病^[1]，同时也是食品甜味剂,抗氧剂,又是双歧杆菌培养基的主要成分之一；在制备D-氨基葡萄糖盐酸盐的过程中,容易产生杂质N-乙酰-D-氨基葡萄糖，所以为了对D-氨基葡萄糖盐酸盐的质量进行控制，建立了检测N-乙酰-D-氨基葡萄糖杂质的方法。目前已有HPLC示差折光分析法测定糖类物质的文献^{[2～ 3]}，但还未见测定N-乙酰-D-氨基葡萄糖的报道，由于D-氨基葡萄糖盐酸盐和N-乙酰-D-氨基葡萄糖均无紫外吸收，结合本实验室情况,本实验采用HPLC-RID法检测，该方法快速、灵敏,结果准确可靠，为D-氨基葡萄糖盐酸盐的纯度检测提供了依据。

1 实验部分

1.1 仪器与设备

日本岛津LC-6A型高效液相色谱仪；RID-6A示差折光检测器；KQ-500DB型数控超声波清洗器。

1.2 试剂

乙腈（色谱纯）；水为超纯水；N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品。

醋酸盐缓冲液：称取0.80g醋酸钠和0.98g正庚烷磺酸钠，加入970ml水溶解，用冰醋酸调节PH至4.5。

2 实验方法

2.1 色谱条件

C18色谱准（250x4.6mm,5μm），流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液（3：97），流速1ml/min，柱温：40℃，进样体积为20μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液的制备

精取122.88 mg N-乙酰-D-氨基葡萄糖于25 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀得4.915 2 mg/mL。

2.2.2 样品溶液的制备

称取50mg样品，置于25ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，超声5min，过0.45μm滤膜，即得。

2.3 系统适应性实验

取标准品溶液（a)，空白溶液(b)，样品溶液(c)，各20μL注入色谱仪，记录色谱图如下：